分子生物實(shí)驗(yàn)常見有毒試劑
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）
用途：DMSO是一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害，改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。
但是研究表明，DMSO存在嚴(yán)重的毒性作用，與蛋白質(zhì)疏水集團(tuán)發(fā)生作用，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性,具有血管毒性和肝腎毒性。
DMSO是毒性比較強(qiáng)的東西，用的時(shí)候要避免其揮發(fā)，要準(zhǔn)備1%-5%的氨水備用，皮膚沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗滌。最為常見的為惡心、嘔吐、皮疹及在皮膚、和呼出的氣體中發(fā)出大蒜、洋蔥、牡蠣味。
吸入：高揮發(fā)濃度可能導(dǎo)致頭痛，暈眩和鎮(zhèn)靜。皮膚：能夠灼傷皮膚并使皮膚有刺痛感，如同所見的皮疹及水泡一樣。若二甲基亞砜與含水的皮膚接觸會(huì)產(chǎn)生熱反應(yīng)。要避免接觸含有毒性原料或物質(zhì)的二甲基亞砜溶液，因其毒性不為人所知，而二甲基亞砜卻可能會(huì)滲入肌膚，在一定條件下會(huì)將有毒物質(zhì)進(jìn)入肌膚。
蛋白電泳（Western Blot）
苯甲基磺酰氟（Phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）用途：常用于蛋白質(zhì)的提取過(guò)程中，主要是絲氨酸蛋白酶抑制劑，苯甲基磺酰氟（PMSF）通常用于制備細(xì)胞裂解液，有助于保存樣品。作為一種非特異性抑制劑，PMSF通常用于保護(hù)樣品免受蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶）以及其他酶的消化功能的影響。PMSF也用于制備從細(xì)胞和組織中提取的蛋白質(zhì)提取物。通過(guò)使含有這種氨基酸的任何酶的絲氨酸羥基失活，PMSF可以防止感興趣的蛋白質(zhì)降解?；谄涠贪胨テ冢仨氃诿總€(gè)凈化步驟中添加該抑制劑。
苯基甲基磺?；锸且环N細(xì)胞毒性化學(xué)物質(zhì)，只能在通風(fēng)柜或經(jīng)認(rèn)證的生物實(shí)驗(yàn)臺(tái)中使用。
AEBSF（4-[2-氨基乙基]-苯磺酰氟化物、鹽酸鹽或Pefabloc）是一種無(wú)毒替代品。它是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑，使用濃度與PMSF相同，但在水緩沖溶液中無(wú)毒且穩(wěn)定。
苯甲基磺酰氟（PMSF），它對(duì)呼吸道黏膜、眼睛和皮膚有非常大的破壞性?？梢蛭搿⒀氏禄蚱つw吸收而致命。戴合適的手套和安全眼鏡，始終在化學(xué)通風(fēng)櫥里使用。在接觸到的情況下，要立即用大量的水沖洗眼睛或皮膚，已污染的工作服丟棄掉。
四甲基乙二胺（Tetramethylethylenediamine，TEMED）用途：TEMED常用于SDS-PAGE中凝膠的制備。與過(guò)硫酸銨連用催化丙烯酰胺的聚合，制取在凝膠電泳用于分離蛋白質(zhì)或核酸的聚丙烯酰胺凝膠。TEMED有強(qiáng)神經(jīng)毒性，須防止誤吸，TEMED易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋，操作時(shí)快速，存放時(shí)密封。
十二烷基硫酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS）十二烷基硫酸鈉 (SDS) 是一種經(jīng)常用于蛋白電泳和蛋白增溶方法的烷基硫酸鹽陰離子去污劑。它是很多細(xì)胞裂解緩沖液配方的成分，包括RIPA緩沖液。典型 SDS 或十二烷基硫酸鹽制備物是多種不同鏈長(zhǎng)度（C10 至 C18）的混合物。但是，蛋白復(fù)性和其他特殊方法要求非常特定的表面活性劑和緩沖液條件。SDS 的這一特殊配方經(jīng)高度純化，從而消除除 C12 外幾乎所有二級(jí)鏈長(zhǎng)度。
它是中等毒性物質(zhì)，能對(duì)皮膚、眼睛、粘膜、上呼吸道、胃產(chǎn)生刺激等急性毒性反應(yīng)。長(zhǎng)期、反復(fù)使用其稀溶液能造成皮膚干裂和接觸性皮炎。長(zhǎng)期吸入對(duì)肺有損害，可能發(fā)生肺部過(guò)敏和導(dǎo)致嚴(yán)重的呼吸道功能紊亂。動(dòng)物靜脈注射試驗(yàn)結(jié)果表明，其對(duì)肺、腎和肝有明顯的毒性反應(yīng)。細(xì)菌的誘變?cè)囼?yàn)為陰性。在化妝品和制劑處方中，主要的不良反應(yīng)是在局部應(yīng)用時(shí)對(duì)皮膚、眼睛產(chǎn)生刺激。丙烯酰胺（acrylamide）—— 分離膠和濃縮膠中的成分SDS-PAGE （十二烷基硫酸鈉–聚丙烯酰胺，sodium dodecyl sulfate – polyacrylamidegel electrophoresis）
聚丙烯酰胺（polyacrylamidegel）本身是無(wú)毒的，因?yàn)楫?dāng)它進(jìn)入人體時(shí)，大部分會(huì)在很短的時(shí)間內(nèi)排出體外，不會(huì)被消化道吸收。大多數(shù)含有聚丙烯酰胺的產(chǎn)品不會(huì)刺激皮膚，只有一些水崩解物可能有殘留堿，重復(fù)長(zhǎng)期接觸會(huì)刺激皮膚，但不會(huì)造成傷害。然而，丙烯酰胺是合成聚丙烯酰胺的單體，就丙烯酰胺而言，它是有毒的。丙烯酰胺是一種神經(jīng)聚丙烯酰胺毒性劑，它會(huì)損害神經(jīng)系統(tǒng)、淺表運(yùn)動(dòng)障礙、肌肉無(wú)力等中毒后的癥狀。丙烯酰胺是2A類（很可能致癌）致癌物，其在動(dòng)物和人體均可代謝轉(zhuǎn)化為其致癌活性代謝產(chǎn)物——環(huán)氧丙酰胺。人們經(jīng)常食用高溫油炸食品會(huì)增加其致癌性，危害身體健康。丙烯酰胺具有中等毒性，對(duì)眼睛和皮膚有一定的刺激作用，可經(jīng)皮膚、呼吸道和消化道吸收，在體內(nèi)有蓄積作用，主要影響神經(jīng)系統(tǒng)，急性中毒十分罕見。長(zhǎng)期低濃度接觸可引起慢性中毒，中毒者出現(xiàn)頭痛頭暈疲勞，嗜睡，手指剌痛，麻木感，常伴有兩手掌發(fā)紅，脫屑，手掌足心多汗，進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)四肢無(wú)力，肌肉疼痛以及小腦功能障礙。具備以下任何一項(xiàng)者，可列為慢性丙烯酰胺中毒觀察對(duì)象。a.接觸丙烯酰胺的局部皮膚出現(xiàn)多汗、濕冷、脫皮、紅斑；b.出現(xiàn)肢端麻木、刺痛、下肢乏力、嗜睡等癥狀；c.神經(jīng)-肌電圖顯示有可疑神經(jīng)源性損害。二硫蘇糖醇（Dithiothreitol，DTT）用途：用于穩(wěn)定含有游離巰基的酶和其他蛋白質(zhì)。已證明其可恢復(fù)這些基團(tuán)因體外氧化而喪失的活性。DTT 可定量還原二硫鍵，確保單硫醇處于還原狀態(tài)。在最終 0.1 M 濃度下，DTT 也廣泛用于破壞 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中的蛋白質(zhì)二硫鍵。
有很強(qiáng)的還原劑，散發(fā)難聞的氣味。可因吸入、咽下或皮膚吸收而危害健康。當(dāng)使用固體或高濃度儲(chǔ)存液時(shí)，戴手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥中操作。
DNA電泳（Southern blot）
溴化乙錠EB（Ethidium bromide，EB）用途：溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號(hào)，可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統(tǒng)拍攝。
溴化乙錠可以嵌入堿基分子中，導(dǎo)致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性！溴化乙錠具有一定的毒性，皮膚吸收可造成傷害。刺激眼睛、皮膚、黏膜和上呼吸道。可誘導(dǎo)突變并可能致癌。戴好手套和護(hù)目鏡，穿好防護(hù)服，在通風(fēng)櫥內(nèi)小心操作。用途：常溫下為紫紅色液體。其主要成分為苯酚和硫氰化胍。苯酚具有毒性和腐蝕性，而硫氰化胍則具有刺激性。PCR, Northern Blot 等實(shí)驗(yàn)中，Trizol 是一種常用的總 RNA 抽提試劑，可以直接從細(xì)胞或組織中提取總 RNA。在樣品裂解過(guò)程中 Trizol 能夠抑制 RNA 酶活性保持 RNA 完整性。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。TRIzol在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性，因此對(duì)純化DNA及標(biāo)準(zhǔn)化RNA的生產(chǎn)十分有用。
含有大量苯環(huán)類有毒物質(zhì)，有很強(qiáng)的毒性、腐蝕性和揮發(fā)性，皮膚接觸 Trizol 會(huì)引起燒傷，進(jìn)入眼睛可能導(dǎo)致失明。不深接觸請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。使用時(shí)戴手套、口罩和護(hù)目鏡做好防護(hù)。苯酚可燃，高毒，對(duì)皮膚、粘膜有強(qiáng)烈的腐蝕作用，可致人體灼傷，可抑制中樞神經(jīng)或損害肝、腎功能；對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害，對(duì)水體和大氣可造成污染。戴好合適的手套和護(hù)目鏡，穿好防護(hù)服，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。若有皮膚接苯酚，可用大量清水沖洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）DEPC即二乙基焦碳酸酯，可滅活各種蛋白質(zhì)，是RNA酶的強(qiáng)抑制劑，是一種潛在的致癌物質(zhì)。
DEPC是一種潛在的致癌物質(zhì)，在操作中應(yīng)盡量在通風(fēng)的條件下進(jìn)行，并避免接觸皮膚。DEPC毒性并不是很強(qiáng)，但吸入的毒性是最強(qiáng)的，使用時(shí)戴口罩。不小心粘到手上注意立即沖洗。用途：氯仿是分子量比較大的有機(jī)溶劑，在提取RNA時(shí)，氯仿可以有效使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。RNA提取過(guò)程，有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和RNA脫離，RNA進(jìn)入水相。氯仿的作用有多個(gè)方面，加入氯仿，雖然有變性蛋白質(zhì)的作用，但是其主要用處是用來(lái)分相，實(shí)際上是加速有機(jī)相和水相的分層；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，氯仿常用于用于各種動(dòng)物的吸入麻醉，其麻醉作用比乙醚大，誘導(dǎo)期及興奮期都極短，吸入氣體中含 1~2% 容量的氯仿即能使動(dòng)物麻醉。
對(duì)皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一種致癌劑，可損害肝和腎。它也易揮發(fā)，避免吸入揮發(fā)的氣體。操作時(shí)戴合適的手套和安全眼鏡并始終在化學(xué)通風(fēng)櫥里進(jìn)行。用途：免疫組化實(shí)驗(yàn)中，取材后的組織或細(xì)胞需立刻投于固定劑中，使組織和細(xì)胞的蛋白質(zhì)凝固，終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng)，防止組織自溶或異溶，以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài)。
甲醛（福爾馬林）有很大的毒性并易揮發(fā)，也是一種致癌劑（不做科研的人都知道）。很容易通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和損傷。避免吸入其揮發(fā)的汽霧。要戴合適的手套和護(hù)目鏡，始終在化學(xué)通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行操作，遠(yuǎn)離熱源、火花及明火。用途：用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中組織的透明和石蠟切片的脫蠟。
二甲苯對(duì)眼及上呼吸道有刺激作用，高濃度時(shí)，對(duì)中樞系統(tǒng)有麻醉作用。急性中毒：短期內(nèi)吸入較高濃度本品可出現(xiàn)麻醉作用。慢性影響：長(zhǎng)期接觸有神經(jīng)衰弱綜合癥，女性有可能導(dǎo)致月經(jīng)異常。皮膚接觸常發(fā)生皮膚干燥、皸裂、皮炎。戴好手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。始終遠(yuǎn)離熱源、火花和明火。
3.處理帶腐蝕性的試劑時(shí)手套戴兩層，還有口罩護(hù)目鏡。4.一定要穿好實(shí)驗(yàn)服（即使自己的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有危險(xiǎn)，也不能保證別人做實(shí)驗(yàn)時(shí)不會(huì)濺到你身上）。5.配置有毒試劑或揮發(fā)性試劑時(shí)一定要在通風(fēng)櫥中操作，這既是對(duì)自己負(fù)責(zé)，也是對(duì)同一區(qū)域的其他人負(fù)責(zé)。6.做實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不要戴著手套亂碰私人物品或開關(guān)門，同理，脫下手套后也別碰實(shí)驗(yàn)物品或徒手摸試驗(yàn)臺(tái)。7.紫外光或紫外線會(huì)損傷眼視網(wǎng)膜，切勿用裸眼和沒(méi)有防護(hù)裝置的紫外光源。8.實(shí)驗(yàn)等待反應(yīng)的時(shí)間盡量不要離開，生物實(shí)驗(yàn)大多很耗時(shí)間，如果一定要離開，千萬(wàn)要囑咐別人幫忙照看。10.不要做任何你覺(jué)得可能不安全的事兒，保護(hù)自己的道理大家都懂，但可能會(huì)犯懶，千萬(wàn)不要心存僥幸，堅(jiān)持養(yǎng)成好習(xí)慣受益終身。
